MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 用戶指南

——精準(zhǔn)識(shí)別豬B細(xì)胞亞群，助力免疫學(xué)與動(dòng)物疾病模型研究

一、產(chǎn)品概述

MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 是AbD Serotec公司（現(xiàn)隸屬于MorphoSys集團(tuán)）研發(fā)的單克隆抗體，專為識(shí)別豬B細(xì)胞亞群設(shè)計(jì)。該抗體通過小鼠雜交瘤技術(shù)制備，具備高特異性、高親和力及低背景信號(hào)的特點(diǎn)，適用于流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫熒光（IF）及Western Blot（WB）等實(shí)驗(yàn)。

核心參數(shù)：

• 貨號(hào)：MCA6099GA

• 規(guī)格：0.1 mg/支（可滿足100次流式實(shí)驗(yàn)或20次WB實(shí)驗(yàn)）

• 保存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融

• 有效期：24個(gè)月（未開封）

• 應(yīng)用領(lǐng)域：豬免疫學(xué)、異種移植研究、豬病模型開發(fā)等

二、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 高特異性

• 免疫原：重組豬B細(xì)胞表面抗原，確?？贵w對(duì)目標(biāo)B細(xì)胞亞群的精準(zhǔn)識(shí)別。

• 交叉反應(yīng)性：經(jīng)ELISA與WB驗(yàn)證，與豬B細(xì)胞特異性結(jié)合，不與T細(xì)胞、NK細(xì)胞等其他免疫細(xì)胞交叉反應(yīng)。

2. 多應(yīng)用兼容性

• 流式細(xì)胞術(shù)：推薦稀釋比例1:50-1:200，可檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中B細(xì)胞比例。

• 免疫組織化學(xué)：適用于石蠟切片與冷凍切片，推薦稀釋比例1:100-1:500。

• 免疫熒光：可與Alexa Fluor® 488、FITC等熒光標(biāo)記物偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)多色熒光標(biāo)記。

• Western Blot：檢測(cè)靈敏度達(dá)1 ng，適用于豬組織裂解液或細(xì)胞裂解液中的B細(xì)胞相關(guān)蛋白檢測(cè)。

3. 質(zhì)量驗(yàn)證

• 純度：通過SDS-PAGE驗(yàn)證，純度≥95%。

• 內(nèi)毒素含量：<0.1 EU/μg，符合無菌實(shí)驗(yàn)要求。

三、操作指南

（一）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 試劑與耗材

• MCA6099GA抗體（貨號(hào)MCA6099GA）

• 熒光標(biāo)記二抗（如Goat Anti-Mouse IgG Alexa Fluor® 488）

• 封閉液（5% BSA或10%山羊血清）

• 洗滌液（PBS + 0.1% Tween-20）

2. 儀器設(shè)置

• 流式細(xì)胞儀：設(shè)置FL1通道（激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)525 nm）。

• 共聚焦顯微鏡：選擇488 nm激光器，配備530/30 nm濾光片。

（二）實(shí)驗(yàn)操作

1. 流式細(xì)胞術(shù)

• 樣本處理：收集豬PBMC，用PBS洗滌后重懸于100 μL FACS緩沖液中。

• 抗體孵育：加入1 μL MCA6099GA抗體（1:100稀釋），4℃避光孵育30分鐘。

• 洗滌：加入2 mL FACS緩沖液，300 × g離心5分鐘，重復(fù)2次。

• 二抗孵育：加入1 μL Alexa Fluor® 488標(biāo)記二抗（1:500稀釋），4℃避光孵育30分鐘。

• 檢測(cè)：重懸于500 μL FACS緩沖液中，上機(jī)檢測(cè)。

2. 免疫組織化學(xué)

• 切片制備：取豬脾臟組織，經(jīng)4%多聚甲醛固定后，石蠟包埋切片（厚度5 μm）。

• 抗原修復(fù)：將切片置于檸檬酸緩沖液（pH 6.0）中，微波加熱10分鐘。

• 封閉：滴加5% BSA，37℃孵育30分鐘。

• 一抗孵育：滴加MCA6099GA抗體（1:200稀釋），4℃過夜。

• 顯色：加入HRP標(biāo)記二抗，DAB顯色后蘇木素復(fù)染。

3. Western Blot

• 電泳：取豬脾臟組織裂解液（20 μg總蛋白），經(jīng)10% SDS-PAGE分離。

• 轉(zhuǎn)膜：將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，300 mA恒流轉(zhuǎn)印90分鐘。

• 封閉：5%脫脂奶粉封閉1小時(shí)。

• 一抗孵育：MCA6099GA抗體（1:1000稀釋），4℃孵育過夜。

• 顯色：加入HRP標(biāo)記二抗，ECL化學(xué)發(fā)光顯影。

（三）數(shù)據(jù)分析

1. 流式細(xì)胞術(shù)

• 使用FlowJo軟件分析B細(xì)胞比例，設(shè)置CD3?門控后統(tǒng)計(jì)B細(xì)胞陽性細(xì)胞。

2. 免疫組織化學(xué)

• 使用Image J軟件定量分析B細(xì)胞密度，計(jì)算每平方毫米內(nèi)的陽性細(xì)胞數(shù)。

3. Western Blot

• 使用Bio-Rad Image Lab軟件分析條帶灰度值，與內(nèi)參（如β-actin）比值確定蛋白表達(dá)量。

四、使用技巧與高效操作

1. 樣本保存

• 豬組織樣本建議液氮速凍后保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

• PBMC樣本需在采集后4小時(shí)內(nèi)處理，或保存于液氮中。

2. 抗體稀釋

• 使用抗體稀釋液（含1% BSA的PBS）進(jìn)行稀釋，避免使用含NaN?的緩沖液。

• 未用完的稀釋抗體可分裝后保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

3. 實(shí)驗(yàn)優(yōu)化

• 流式細(xì)胞術(shù)：若背景信號(hào)高，可增加FACS緩沖液中BSA濃度至5%。

• 免疫組織化學(xué)：若顯色不均，可延長(zhǎng)抗原修復(fù)時(shí)間至15分鐘。

五、注意事項(xiàng)

1. 安全規(guī)范

• 操作時(shí)佩戴手套與口罩，避免抗體污染。

• 廢棄物需按生物安全等級(jí)處理。

2. 操作細(xì)節(jié)

• 移液精度：使用校準(zhǔn)后的移液器，誤差<±1%。

• 孵育溫度：一抗與二抗孵育需在4℃或室溫下進(jìn)行，避免37℃高溫導(dǎo)致非特異性結(jié)合。

3. 故障排除

• 無信號(hào)：檢查抗體是否失效（可通過WB檢測(cè)抗體質(zhì)量），或樣本是否正確處理。

• 高背景：增加封閉時(shí)間或降低抗體濃度。

六、用戶評(píng)價(jià)與支持

• 用戶反饋：

• “MCA6099GA抗體在豬B細(xì)胞檢測(cè)中表現(xiàn)出的特異性，背景信號(hào)極低。"

• “適用于多種實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，顯著提高了實(shí)驗(yàn)效率。"