Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm間距電擊杯用戶(hù)指南

——精準(zhǔn)電轉(zhuǎn)化，助力基因編輯與細(xì)胞工程

一、產(chǎn)品概述

Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm間距電擊杯（MicroPulser Electroporation Cuvettes）是專(zhuān)為高場(chǎng)強(qiáng)電穿孔設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)室耗材，適用于酵母、細(xì)菌及其他真核細(xì)胞的基因?qū)肱c編輯。其核心優(yōu)勢(shì)包括高轉(zhuǎn)化效率、無(wú)菌保障及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、合成生物學(xué)及藥物研發(fā)領(lǐng)域。

二、技術(shù)參數(shù)

三、核心功能與優(yōu)勢(shì)

1. 高轉(zhuǎn)化效率

• 窄間距設(shè)計(jì)：0.2 cm間距產(chǎn)生高場(chǎng)強(qiáng)，顯著提升外源DNA/RNA的細(xì)胞攝取率。

• 精準(zhǔn)公差控制：電極間距誤差極小，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

2. 無(wú)菌保障

• 凈室生產(chǎn)：裝配、洗滌、加蓋、包裝全流程在凈室完成，避免污染。

• Gamma射線滅菌：獨(dú)立包裝，開(kāi)袋即用，無(wú)需額外滅菌步驟。

3. 結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性

• 耐高壓聚碳酸酯：可承受電穿孔儀的高電壓脈沖，避免擊穿或泄漏。

• 無(wú)縫模制腔體：避免滲漏，確保鋁板平行，保障脈沖均勻性。

4. 操作便捷性

• 顏色編碼蓋帽：綠色標(biāo)識(shí)0.2 cm間距，便于快速區(qū)分不同規(guī)格電擊杯。

• 平滑電極表面：11步蝕刻處理，確保脈沖傳送一致性，減少細(xì)胞損傷。

四、操作指南

（一）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 設(shè)備檢查

• 確認(rèn)電穿孔儀（如Gene Pulser Xcell）與電擊杯型號(hào)匹配。

• 檢查電擊杯包裝完整性，避免使用已開(kāi)封或損壞的產(chǎn)品。

2. 細(xì)胞處理

• 制備感受態(tài)細(xì)胞（如酵母、細(xì)菌），濃度建議為1–10×10?細(xì)胞/mL。

• 加入目的DNA（如質(zhì)粒），混勻后冰浴5分鐘。

3. 電擊杯預(yù)冷

• 將電擊杯插入冰中預(yù)冷5分鐘，減少電轉(zhuǎn)過(guò)程中的熱損傷。

（二）電穿孔操作

1. 樣品加載

• 用200 μL槍頭（切除0.5 cm）將細(xì)胞-DNA混合物緩慢注入電擊杯，避免氣泡。

• 立即蓋上杯蓋，確保密封性。

2. 參數(shù)設(shè)置

• 酵母：電壓170 V，電容950 μF，電轉(zhuǎn)液100 μL。

• 細(xì)菌：電壓150 V，電容950 μF，電轉(zhuǎn)液100 μL。

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞（需優(yōu)化）：電壓80–160 V，電容800–1000 μF。

• 根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型選擇參數(shù)（示例）：

3. 電擊與復(fù)蘇

• 將電擊杯放入電穿孔儀，啟動(dòng)脈沖。

• 電擊后立即加入預(yù)冷培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至離心管中復(fù)蘇。

（三）實(shí)驗(yàn)后處理

1. 電擊杯清潔

• 用去離子水或70%乙醇沖洗內(nèi)腔，避免細(xì)胞碎片殘留。

• 重復(fù)使用可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率下降，建議單次使用后丟棄。

2. 細(xì)胞培養(yǎng)

• 根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型選擇復(fù)蘇條件（如37℃培養(yǎng)箱、抗生素篩選）。

• 孵育12–48小時(shí)后，檢測(cè)基因表達(dá)或編輯效率。

五、典型應(yīng)用場(chǎng)景

1. 基因編輯

• CRISPR/Cas9：通過(guò)電穿孔將sgRNA與Cas9質(zhì)粒導(dǎo)入酵母或細(xì)菌，實(shí)現(xiàn)基因敲除或敲入。

• 同源重組：結(jié)合供體DNA（donor DNA），進(jìn)行高精度基因編輯。

2. 細(xì)胞工程

• 重組蛋白表達(dá)：將外源基因?qū)虢湍富蚣?xì)菌，生產(chǎn)治療性蛋白。

• 干細(xì)胞轉(zhuǎn)染：優(yōu)化參數(shù)后，用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的基因?qū)搿?/p>

3. 合成生物學(xué)

• 代謝通路改造：通過(guò)電穿孔導(dǎo)入多基因質(zhì)粒，構(gòu)建高效代謝工程菌株。

六、注意事項(xiàng)

1. 無(wú)菌操作

• 電擊杯開(kāi)蓋后需立即使用，避免暴露于空氣中過(guò)久。

• 使用后需按制造商說(shuō)明清潔消毒，防止交叉污染。

2. 參數(shù)優(yōu)化

• 不同細(xì)胞類(lèi)型需調(diào)整電壓、電容及電轉(zhuǎn)液體積。

• 建議參考Bio-Rad參數(shù)表或文獻(xiàn)進(jìn)行優(yōu)化。

3. 設(shè)備兼容性

• 確認(rèn)電穿孔儀支持0.2 cm間距電擊杯（如Gene Pulser系列）。

• 避免使用非兼容設(shè)備，以免損壞電擊杯或儀器。

4. 儲(chǔ)存條件

• 未開(kāi)封電擊杯可室溫儲(chǔ)存，避免高溫或潮濕環(huán)境。

• 已開(kāi)封電擊杯需立即使用，或密封保存于4℃。