案例一：基因表達(dá)分析

• 實(shí)驗(yàn)背景：研究團(tuán)隊(duì)欲通過 qRT - PCR 檢測(cè)某疾病相關(guān)基因在不同組織樣本中的表達(dá)差異。

• 檢測(cè)結(jié)果：使用 Qubit RNA IQ Assay Kit 對(duì)提取的 RNA 樣本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)部分樣本 RIN 值≥7，濃度在 200 - 500 ng/μL 之間，28S/18S 比值在 1.8 - 2.2 之間；而另一部分樣本 RIN 值在 5 - 7 之間，濃度較低，約為 50 - 100 ng/μL，28S/18S 比值略低于 1.8。

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)整：對(duì)于 RIN 值和濃度都較好的樣本，可直接用于 qRT - PCR 實(shí)驗(yàn)，且可適當(dāng)減少每個(gè)反應(yīng)的 RNA 上樣量，以避免 RNA 過量導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。對(duì)于 RIN 值在 5 - 7 之間的樣本，由于其 RNA 有一定程度降解，可能影響定量準(zhǔn)確性，研究團(tuán)隊(duì)決定增加每個(gè)反應(yīng)的 RNA 上樣量，并設(shè)置多個(gè)復(fù)孔，以提高檢測(cè)的可靠性。同時(shí)，在數(shù)據(jù)分析時(shí)，對(duì)這些樣本的數(shù)據(jù)進(jìn)行更謹(jǐn)慎的處理和驗(yàn)證。

案例二：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

• 實(shí)驗(yàn)背景：科研人員計(jì)劃對(duì)某種植物在不同生長(zhǎng)階段的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序，以了解其基因表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。

• 檢測(cè)結(jié)果：Qubit RNA IQ Assay Kit 檢測(cè)顯示，大部分樣本 RIN 值＞8，濃度在 300 - 800 ng/μL 之間，28S/18S 比值接近 2.0，但有少數(shù)樣本 RIN 值為 6 - 7，濃度也相對(duì)較低，約為 100 - 200 ng/μL。

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)整：對(duì)于高質(zhì)量的樣本，按照標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建流程進(jìn)行操作。而對(duì)于 RIN 值為 6 - 7 的樣本，考慮到轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)?RNA 完整性要求較高，研究人員首先嘗試優(yōu)化 RNA 提取方法，重新提取這些樣本的 RNA，若再次檢測(cè)結(jié)果仍不理想，他們決定將這些樣本用于其他對(duì) RNA 質(zhì)量要求稍低的實(shí)驗(yàn)，如簡(jiǎn)單的基因差異表達(dá)分析，而不用于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，以免因 RNA 質(zhì)量問題影響測(cè)序數(shù)據(jù)的質(zhì)量和后續(xù)分析。

案例三：microRNA 研究

• 實(shí)驗(yàn)背景：某實(shí)驗(yàn)室致力于研究 microRNA 在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，需要從腫瘤組織和正常對(duì)照組織中提取 RNA，進(jìn)行 microRNA 的表達(dá)譜分析。

• 檢測(cè)結(jié)果：Qubit RNA IQ Assay Kit 的檢測(cè)結(jié)果表明，所有樣本的 RIN 值都在 7 - 8 之間，濃度在 150 - 400 ng/μL 之間，但 28S/18S 比值在 1.6 - 1.8 之間，略低于理想范圍。

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)整：由于 microRNA 相對(duì)較小且穩(wěn)定性較高，對(duì)總 RNA 的完整性要求不像 mRNA 那樣嚴(yán)格。雖然 28S/18S 比值略低，但 RIN 值表明 RNA 整體質(zhì)量尚可。因此，研究人員在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，適當(dāng)增加了 RNA 的起始量，以確保有足夠的 microRNA 用于后續(xù)的分離和檢測(cè)步驟。同時(shí)，在數(shù)據(jù)分析階段，采用了一些專門針對(duì) microRNA 表達(dá)譜分析的算法和質(zhì)量控制措施，以減少可能因 RNA 質(zhì)量問題帶來(lái)的誤差。