原理：通過物理手段將腫瘤組織分散成單個細胞，如用剪刀剪碎、研磨或使用組織勻漿器等。

操作：將腫瘤組織置于無菌培養(yǎng)皿中，用眼科剪將其剪成小塊，再放入勻漿器中，加入適量的緩沖液進行研磨，最后通過濾網(wǎng)過濾，得到單細胞懸液。

特點：操作簡單、快速，適用于質地較軟的腫瘤組織。但可能會對細胞造成機械損傷，影響細胞活性和完整性。

原理：利用蛋白酶等消化酶將腫瘤組織中的細胞外基質和連接蛋白水解，使細胞彼此分離。

操作：將腫瘤組織切成小塊，放入含有胰蛋白酶、膠原酶等消化酶的緩沖液中，在適當?shù)臏囟群蜁r間條件下進行消化，消化完成后加入含血清的培養(yǎng)基終止反應，最后通過離心收集細胞，得到單細胞懸液。

特點：能有效解離腫瘤組織，獲得較高的細胞產量和活性。但不同腫瘤組織對酶的敏感性不同，需要優(yōu)化消化條件，且消化過度可能會破壞細胞表面抗原。

原理：結合機械解離和酶消化的優(yōu)點，先對腫瘤組織進行機械切割，再用酶進行消化，以提高細胞解離效果。

操作：先將腫瘤組織剪成小塊，然后用胰蛋白酶或膠原酶等進行消化，消化過程中可適當進行輕柔的吹打或振蕩，幫助細胞分散，最后通過過濾和離心得到單細胞懸液。

特點：可提高細胞產量和活性，減少細胞損傷，適用于大多數(shù)腫瘤組織。但操作相對復雜，需要嚴格控制消化時間和機械作用強度。

原理：根據(jù)細胞的密度差異，在密度梯度介質中進行離心，使不同密度的細胞分布在不同的層次，從而分離出單個細胞。

操作：將腫瘤組織消化后的細胞懸液小心地鋪在密度梯度介質（如 Ficoll - Hypaque）上，然后進行離心。離心后，不同密度的細胞會在梯度介質中形成不同的條帶，收集所需的細胞條帶，經過洗滌后即可得到單細胞懸液。

特點：可有效分離出不同類型的細胞，提高細胞純度。但需要特殊的密度梯度介質和離心設備，操作過程較為繁瑣。